Методика биотестирования ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.12-06 Т 16.1:2:2.3:3.9-06

Описание метода:

Настоящий документ устанавливает методику определения острой токсичности питьевых, грунтовых, поверхностных и сточных вод, а также водных вытяжек из почв, осадков сточных вод и отходов в лабораторных условиях с использованием в качестве тест-объекта низших ракообразных дафний.

Методика основана на определении смертности дафний (Daphnia magna Straus) при воздействии токсических веществ, присутствующих в исследуемой водной среде, по сравнению с контрольной культурой в пробах, не содержащих токсических веществ (контроль).

Острое токсическое действие исследуемой воды или водной вытяжки из почв, осадков сточных вод и отходов на дафний определяется по их смертности (летальности) за определенный период экспозиции. Критерием острой токсичности служит гибель 50 % и более дафний за 48 часов в исследуемой пробе при условии, что в контрольном эксперименте все рачки сохраняют свою жизнеспособность.

В экспериментах по определению острого токсического действия устанавливают:

• среднюю летальную концентрацию отдельных веществ (кратность разбавления вод или водной вытяжки из почв, осадков сточных вод и отходов, содержащих смеси веществ), вызывающую гибель 50% и более тест-организмов (ЛК_50-48, ЛКР_50-48);
• безвредную кратность разбавления вод, водных вытяжек, вызывающую гибель не более 10 % тест-объектов за 48-часовую экспозицию (БКР_10-48).

Оборудование и материалы:

Для проведения исследований по данной методике необходимы следующие средства измерений, материалы и реактивы:

• климатостат Р-1* (бокс для культивирования дафний) или эквивалентное приспособление, позволяющее поддерживать освещение лампами дневного света от (500-1000) лк, фотопериод (12+12) ч и температуру окружающего воздуха (20 ± 2) °С;
• устройство для экспонирования рачков УЭР-02* в комплекте со стеклянными пробирками объемом 100 см3;
• культиватор КВ–05 для культивирования водорослей, ТУ 5100-001-02067876-2004;
• весы лабораторные общего назначения, 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г (ГОСТ 24104-88);
• весы лабораторные общего назначения, 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 1000 г (ГОСТ 24104-88);
• меры массы (ГОСТ 7328-82);
• рН-метр (ГОСТ 25.7416.01-71);
• люксметр любого типа, например, цифровой ТЮ 1403 (ТУ 4485-0152-05764771-96);
• фотоэлектроколориметр типа КФК-3 или аналогичный;
• термометр лабораторный шкальный с диапазоном измерения от 0 до 50 °С с ценой деления шкалы 0,5 °С (ГОСТ 215-73);
• термометр гидрологический с диапазоном измерения от -3 до +65 °С с ценой деления шкалы 0,5 °С, тип ТМ-14 (ГОСТ 2045);
• центрифуга лабораторная медицинская (ТУ 5-375-4261-76), или типа ЦЛН-1 с комплектом пробирок (ТУ 5-4260);
• холодильник бытовой, обеспечивающий замораживание (-20 ± 1°С) и хранение проб (от +2 до +4 °С);
• ткани шелковые (для муки и крахмала — мельничный газ) № 25-43, число отверстий, приходящихся на 1 см, соответствует номеру (ГОСТ 4403-67);
• сачки диаметром 1-2 см из мельничного газа (изготавливаются кустарно);
• пипетки автоматические дозаторы (любого типа) объемом 0,1 см3 и 0,2 см33;
• пипетки стеклянные объемом 2 см3 с отрезанным и оплавленным концом для пересадки рачков (ГОСТ 29227-91);
• микропипетки 0,1 см3, 0,2 см3 с ценой деления 0,01 см3 (ГОСТ 29227-91);
• воронки лабораторные (ГОСТ 25336-82Е);
• цилиндры вместимостью 25, 50, 100, 1000 см3 второго класса точности (ГОСТ 1770-74);
• стаканы стеклянные лабораторные вместимостью 150, 200, 250, 1000 см3 (ГОСТ 25336-82Е);
• колбы мерные 2-25-2. 2-50-2, 2-100-2 (ГОСТ 1770-74);
• пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 см3 с ценой деления 0,1 см3 (ГОСТ 29227-91);
• вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72);
• вода питьевая (ГОСТ 2874-82);
• калий двухромовокислый стандарт-титр (ТУ 6-09-2540-87);
• калий азотнокислый х.ч. (ГОСТ 4217-77);
• калий фосфорнокислый однозамещенный 3-водный (ГОСТ 4198-75);
• магний сернокислый 7-водный (ГОСТ 4523-77);
• кадмий сернокислый 8-водный (ГОСТ 4456-75);
• цитрат железа;
• раствор микроэлементов;
• культура зеленой водоросли хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer);
• дрожжи хлебопекарские (ГОСТ 171-81);
• культура тест-организмов – дафний (Daphnia magna Straus) с характеристиками по "Определителю пресноводных беспозвоночных Европейской части СССР" (планктон и бентос). – Л.: Гидрометеоиздат, 1977 (Л.А. Кутикова, Я.И. Старобогатов).

* В настоящее время климатостат Р-1 и устройство для экспонирования рачков УЭР-02 сняты с производства и заменены климатостатом Р2 и устройством для экспонирования рачков УЭР-03, полностью соответствующими «примечанию» (см ниже).

Примечание. Допускается использование средств измерений, вспомогательных устройств и материалов другого типа, имеющих аналогичные характеристики.