Методика биотестирования ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.10-04 / 16.1:2:2.3:3.7-04

Общая информация

ФР.1.31.2009.06642

Автор: Григорьев Ю.С.

Полное наименование: Методика определения токсичности проб поверхностных пресных, грунтовых, питьевых, сточных вод, водных вытяжек из почвы, осадков сточных вод и отходов по изменению оптической плотности культуры водоросли хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer).

Дата издания: 2004 г.; 2007 г.; 2012 г.; действующее издание 2014 г.

Время проведения теста: 22 часа. (считается острым экспериментом, хотя в процессе биотестирования сменяется 5 поколений клеток водоросли (условно острый эксперимент) Тест функция: прирост клеток водоросли по отношению к контролю.

Критерии токсичности: снижение на 20% и более (подавление роста) или увеличение на 30% и более (стимуляция роста) величины оптической плотности культуры водоросли хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer).

Описание метода:

Методика основана на регистрации различий в оптической плотности тест-культуры водоросли хлорелла, выращенной на среде, не содержащей токсических веществ (контроль) и тестируемых проб поверхностных пресных, грунтовых, питьевых, сточных вод, водных вытяжек из почвы, осадков сточных вод и отходов (опыт), в которых эти вещества могут присутствовать. Измерение оптической плотности суспензии водоросли позволяет оперативно контролировать изменение численности клеток в контрольном и опытном вариантах острого токсикологического эксперимента, проводимого в специализированном многокюветном культиваторе.

Критерием токсичности воды является снижение на 20% и более (подавление роста) или увеличение на 30% и более (стимуляция роста) величины оптической плотности культуры водоросли, выращиваемой в течении 22 часов на тестируемой воде по сравнению с ее ростом на контрольной среде, приготовленной на дистиллированной воде.

В экспериментах по определению острого токсического действия устанавливают токсичную концентрацию отдельных веществ или токсичную кратность разбавления вод и водных вытяжек, содержащих смеси веществ, вызывающие снижение на 20 % и более или увеличение на 30 % и более величины оптической плотности тест-культуры водоросли по сравнению с контролем за 22 часа световой экспозиции.

Контроль качества оценки токсичности воды проводится один раз в квартал. Он осуществляется посредством определения чувствительности используемого тест-организма (водоросли хлорелла) к "эталонному" токсиканту – сульфату кадмия (CdSO4*8 H2O). При хорошем состоянии культуры водоросли и правильно поставленном эксперименте после 22 часов культивирования 50% подавление прироста по сравнению с контролем должно наблюдаться в диапазоне концентраций сульфата кадмия 0,06-0,24 мг/дм3. При этом оптическая плотность культуры водоросли в контрольном варианте за этот период должна достигнуть величины 0,15±0,03. Это же показатель может быть использован для текущего контроля состояния тест–культуры водоросли.

Оборудование и материалы:

Для проведения исследований по данной методике необходимы следующие средства измерений, материалы и реактивы:

• многокюветный культиватор водорослей КВМ – 05, ТУ 5100-002-02067876-2004;
• фотоэлектроколориметр КФК-3 или аналогичный;
• культиватор КВ–05, ТУ 5100-001-02067876-2004;
• весы лабораторные общего назначения (ГОСТ 24104-2001);
• гири (ГОСТ 7328-2001);
• холодильник бытовой, обеспечивающий замораживание (-18°С) и хранения проб (+2 – 4) °С;
• перестраиваемая автоматическая пипетка на 1-5 см3 или стеклянные пипетки на 1, 5 и 10 см3 (ГОСТ 29227-91);
• термометр лабораторный жидкостной стеклянный (ГОСТ 29224-91);
• мерный цилиндр на 100 см3 (ГОСТ 1770-74);
• стаканы на 50 и 200 см3 (ГОСТ 25336-82);
• дистиллированная вода (ГОСТ 6709-72);
• калий азотнокислый х.ч. (ГОСТ 4217-77);
• калий фосфорнокислый однозамещенный 3-водный (ГОСТ 4198-75);
• магний сернокислый 7-водный (ГОСТ 4523-77);
• кадмий сернокислый 8-водный (ГОСТ 4456-75);
• цитрат железа;
• раствор микроэлементов;
• культура зеленой водоросли (Chlorella vulgaris Beijer);

Примечание. Допускается использование средств измерений, вспомогательных устройств и материалов другого типа, имеющих аналогичные метрологические характеристики.