Методика биотестирования ПНД Ф 14.1:2:4.16-09 / 16.1:2.3.3.14-09

Общая информация

ФР.1.31.2009.06643

Авторы: Григорьев Ю.С., Власова Е.С.

Полное наименование: Методика определения токсичности питьевых, природных и сточных вод, водных вытяжек из почв, осадков сточных вод и отходов по изменению относительного показателя замедленной флуоресценции (ОПЗФ) культуры водоросли хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer).

Дата издания: 2009 г.

Время проведения теста: в остром эксперименте: 1.5 ч., в хроническом эксперименте: нет.

Тест функция: изменение замедленной флуоресценции хлорофилла.

Критерии токсичности: уменьшение величины ОПЗФ на 25% и более или увеличение на 25% и более после экспонирования суспензии водоросли в течение 1 часа в тестируемой воде по сравнению с этим показателем в контрольной среде

---

Описание метода:

Методика основана на регистрации различий в величине ОПЗФ тест-культуры водоросли хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer), экспонируемой в течение 1 часа в среде, не содержащей токсических веществ (контроль) и тестируемых пробах поверхностных пресных, грунтовых, питьевых, сточных вод, водных вытяжек из почвы, осадков сточных вод и отходов (опыт), в которых эти вещества могут присутствовать.

Величина ОПЗФ суспензии водоросли, в виде соотношения индукционных максимумов замедленной флуоресценции (послесвечения), регистрируемых в течении нескольких секунд при импульсном возбуждении светом высокой и низкой интенсивностей, позволяет оперативно выявлять различия в фотосинтетической активности тест-организма в контрольном и опытном вариантах острого токсикологического эксперимента.

В силу относительности используемого показателя замедленной флуоресценции его величина практически не зависит от мутности и цветности тестируемых вод. В то же время при подавлении загрязняющими веществами фотосинтетической функции водоросли значение ОП ЗФ многократно снижается, а при стимуляции – возрастает. Критерием токсичности воды является уменьшение величины ОПЗФ на 25% и более или увеличение на 25% и более после экспонирования суспензии водоросли в течение 1 часа в тестируемой воде по сравнению с этим показателем в контрольной среде, приготовленной на дистиллированной воде.

В экспериментах по определению острого токсического действия устанавливают токсичную концентрацию отдельных веществ или токсичную кратность разбавления вод и водных вытяжек, содержащих смеси веществ, вызывающие снижение или увеличение на 25% и более величины ОПЗФ тест-культуры водоросли по сравнению с контролем после 1 часа световой экспозиции.

Контроль качества оценки токсичности воды проводится один раз в квартал. Он осуществляется посредством определения чувствительности используемого тест-организма (водоросли хлорелла) к "эталонному" токсиканту – сульфату кадмия (CdSO₄*8/3 H₂O). При хорошем состоянии культуры водоросли и правильно поставленном эксперименте после 1 часа световой экспозиции 50% снижение ОПЗФ по сравнению с контролем должно наблюдаться в диапазоне концентраций сульфата кадмия 1,46 – 5,84 мг/дм³.

---

Оборудование и материалы:

Для проведения исследований по данной методике необходимы следующие средства измерений, материалы и реактивы:

• флуориметр Фотон-10 ТУ 4437-007-26218570-2009;
• многокюветный культиватор водорослей КВМ – 05, ТУ 3615-006-26218570-2007;
• измеритель ИПС-03 ТУ 4437-003-26218570-2006 (№ 34930-07 в Госреестре СИ);
• культиватор КВ–05, ТУ 3615-006-26218570-2007;
• весы лабораторные общего назначения (ГОСТ 24104-2001);
• гири (ГОСТ 7328-2001);
• холодильник бытовой, обеспечивающий замораживание (-18°С) и хранения проб (+2 – +4) °С;
• перестраиваемая автоматическая пипетка на 1-5 см3 или стеклянные пипетки на 1, 5 и 10 см3 (ГОСТ 29227-91);
• термометр лабораторный жидкостной стеклянный (ГОСТ 29224-91);
• мерный цилиндр на 100 см3 (ГОСТ 1770-74);
• стаканы на 50 и 200 см3 (ГОСТ 25336-82);
• дистиллированная вода (ГОСТ 6709-72);
• калий азотнокислый х.ч. (ГОСТ 4217-77);
• калий фосфорнокислый однозамещенный 3-водный (ГОСТ 4198-75);
• магний сернокислый 7-водный (ГОСТ 4523-77);
• кадмий сернокислый 8/3-водный (ГОСТ 4456-75);
• цитрат железа;
• раствор микроэлементов;
• культура зеленой водоросли хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer).

Примечание. Допускается использование средств измерений, вспомогательных устройств и материалов другого типа, имеющих аналогичные метрологические характеристики.